核心变革，重塑未来｜病毒载体如何引领基因治疗新突破？

根据治疗目选择合适的病毒载体类型，常见的有 AAV、腺病毒（Ad）与逆转录病毒（或慢病毒）等。此外，需要对相应的载体进行基因元件的设计与优化，确保其能够携带目的基因元件高效进入目标细胞，并在目标细胞中有效表达。除了常见的通过病毒载体实现基因补偿的方式和体外基因编辑细胞进行基因治疗外，研究人员也在探索使用病毒载体搭载基因编辑元件直接进行体内编辑，在患者体内直接修正病变基因，实现更为长期甚至永性的治疗效果，目前该疗法已步入临床试验阶段。

病毒载体生产中常用的细胞系包括 HEK293 及其衍细胞系（如 HEK293T、HEK293F）以及 CHO 细胞系等。目前，用于病毒载体的规模化生产的细胞培养系统主要包括贴壁细胞培养系统和悬浮细胞培养系统。传统的贴壁培养工艺放大难度大，人力成本高，且细胞密度相对低，产量也相对较低。微载体或片状载体培养系统虽能提高细胞产量并减少人力成本，但高效转染困难是其主要缺点。相比之下，悬浮细胞培养技术更能满足临床规模生产的需求。无血清悬浮培养不仅减少了血清的使用，降低了生产成本，还简化了下游纯化技术。因此，开发低成本的悬浮培养生产模式是大规模病毒载体生产工艺未来的发展方向。

基因治疗病毒载体生产是复杂且关键的过程。在病毒载体方面，需依治疗目选合适类型如 AAV、腺病毒等并优化基因元件；细胞培养上，HEK293 和 CHO 等细胞系常用，悬浮培养是规模化生产趋势，早期要驯化细胞并优化参数。病毒载体生产含转染、培养、纯化质检等多步骤，转染环节关键，不同转染法各具优劣。同时，细胞培养种子扩增中，从冷冻细胞到生物反应器接种物制备要防污染，选好设备与转移方法，在对数生长期传代，优化摇瓶和生物反应器培养参数，强化扩种可提升效率，这些方面的优化对基因治疗发展意义重大。