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公司新闻/正文
新鲜出炉！超速离心如何助力肿瘤研究？
692 人阅读发布时间：2024-06-04 11:06
近期，来自武汉大学的科研人员以小鼠原发性乳腺肿瘤细胞为研究对象，提出了一种高效分离 TEVs （Tumor-derived extracellular vesicles）的新方案。这一方案通过差速超速离心法，仅用时 4 小时，就能从复杂的肿瘤细胞中提取出高纯度的 TEVs。这不仅为深入研究 TEVs 的生理功能提供了可能，也为癌症的诊断和治疗开辟了新的思路：
TEVs 的重要地位
TEVs，即肿瘤来源的细胞外囊泡，是癌症研究中的重要角色。它们就像信息传递的使者，在亲代细胞和受体细胞之间穿梭，传递着影响癌症进展的“密信”。TEVs 内包裹的生物活性物质，如脂质体、蛋白质、核酸和代谢物，对肿瘤发生、转移生态位的形成以及免疫平衡都起着至关重要的作用。
提纯 TEVs 变得更快，就意味着研究的效率可以变得更高。下面，就跟着小 E 一起看看这位作者是如何加速 TEVs 提纯的。
作者介绍了通过差速超速离心法高效分离肿瘤源细胞外囊泡（TEVs）的完整步骤，涉及组织分离、酶消化和离心操作，并分享了获取高纯度、高产率 EVs 的实用技巧，最后通过透射电子显微镜和纳米流式细胞仪对 EVs 进行表征。
选对离心方案：差速超速离心！TEVs 的“提纯术”
差速离心法，顾名思义，就是通过不同速度的离心操作，利用 TEVs 与杂质颗粒在大小和密度等参数上的差异，逐步将其分离出来。科研人员通过 5 步离心操作，利用 Eppendorf 5810 R 离心机，依次施加 500 x g 和 3,000 x g，随后通过 10,000 x g，30 min 的离心步骤，完成了 TEVs 的初步分离。
图 1：离心分离步骤
在最后 2 步最关键的超速离心操作中，研究人员选用了 Eppendorf Himac CP80WX 超速离心机，凭借 P50A3 固定角转的高性能，以 RCF 110,000 x g、4 ℃、70 min 重复两次，成功将 TEVs 从复杂的细胞环境中分离出来。
▲ 全新一代 CP-NX 系列超离和 P50A3 转子
P50A3 通量：24 x 1.5mL
抖落离心技巧（二）：让 TEVs “脱颖而出”
图 2：处理 TEV 沉淀技巧
（A）离心后，从沉淀对面小心吸除上清，避免影响 TEV 沉淀；（B）沉淀附着在离心管侧壁。
在离心操作过程中，科研人员还分享了一些实用技巧和建议，以确保 TEVs 的高纯度和高收率：
▲ 在取上清液时，要尽可能地快，避免细胞沉淀再扩散；
▲ 在选用超速离心管时，要先用清水和 ddH2O 充分冲洗，避免管子内部的涂层粘附 TEVs；
▲ 在过滤操作中，要控制挤压过滤器的力度，避免 MVs（微囊泡）穿过滤器等；
▲ 如果需要进一步纯化 TEVs 颗粒，可以将 TEVs 颗粒在 2.5 mL PBS 中重悬，然后将样品缓慢加到 0.5 mL 蔗糖/重水垫液层之上，然后 110,000 x g， 70 min，4 ℃ 离心。
经过上述操作之后，将最后所得的 TEVs 沉淀在冰冷的无菌 PBS 缓冲液中重悬，即可作为透射电镜、免疫印迹和纳米流式细胞术的测试样品，可以对其进行进一步的鉴定和研究。
作者发现，对于脂肪组织，在 I 型胶原酶消化 0.5 小时的情况下，EV 的纯化效率最高， 且都呈现出典型的杯状外泌体形态。
CP-NX 系列超速离心机助力外泌体纯化
通过文献作者的分享，可以看出差速超速离心法是一种高效且高产的 TEVs 分离方法。Eppendorf CP-NX 系列超速离心机（本文 CP80WX 是上一代机型）凭借其出色的性能，可实现细胞外囊泡的精细纯化。
随着科研技术的不断进步和肿瘤研究的深入发展，相信 Eppendorf 超速离心机将在未来的癌症诊断和治疗中发挥更加重要的作用。