NK细胞疗法：从基础研究到临床应用的探索与突破

01 血液采集与 PBMC 分离：采集 18-30 岁健康供体的外周血，对其进行包括传染病病原体检测、细胞总数、CD3-CD56+ 细胞比例、细胞活率等多项检测，筛选合格供体。之后通过单采血操作，通常一份血液样本可获取几十亿个 PBMC。

02 NK 细胞的激活与扩增：通过特定的生长因子（如 IL-2、IL-15 等）和其他因子，对 NK 细胞进行激活和扩增。这个过程一般需要 6-14 天，通过激活和扩增，NK 细胞的数量和功能都会明显增强。

03 NK 细胞的收获与冻存：完成扩增的 NK 细胞经离心去除培养基后，需使用无菌 PBS 缓冲液洗涤以去除残留细胞因子及代谢废物。冻存入库前需取样进行无菌检测、支原体筛查及内毒素检测、细胞总数、细胞活率、CD3-CD56+ 细胞比例等多项质检。

01 细胞的筛选与重编程：通过非整合型重编程技术（如质粒转染、蛋白因子、仙台病毒、mRNA 或小分子化合物等方式）将体细胞转化为 iPSC，为后续细胞库的建立及定向分化为 NK 细胞奠定基础。

02 克隆筛选及细胞建库：检测筛选 iPSC 株系，作为原始细胞库（PCB），经扩大培养建立主细胞库（MCB），最终从 MCB 分装建立工作细胞库（WCB）

03 细胞的定向分化、扩增与培养：细胞定向分化成功后，需在严格的无菌条件下，使用专门的培养基和生物反应器系统对 iNK 细胞进行大规模扩增。